《表1 引物序列Tab.1 Primer sequences》

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《番茄不同截短U3启动子的克隆及功能分析》

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注:下划线部分为受体质粒碱基序列。Note:Underlined for the acceptor plasmid partial base sequence.

将中蔬四号番茄品种播种于含蛭石和营养土的土壤中，取生长21～28 d番茄幼苗叶片，采用植物基因组DNA提取试剂盒提取番茄基因组DNA，用保守的U3 RNA序列在番茄基因组数据库中搜索候选U3 RNA对应的U3启动子序列。本研究采用2轮PCR的方法，以番茄基因组DNA为模板设计引物（表1），第1轮PCR扩增产物为SlU3-1P、Sl U3-3P、SlU3-4P启动子全长，用PhusionDNA聚合酶进行扩增，反应程序为94℃4 min；98℃30 s，58℃30 s，72℃2 min 30 s，35个循环；72℃8 min。反应体系为5×Phusion Buffer 4μL；2.5 mmol/L d NTP1.6μL；ddH2O 11μL；上下游引物各1μL；Phusion超保真DNA聚合酶0.4μL；DNA模板1μL；共20μL体系。