《表1 引物碱基序列和扩增片段的长度Tab.1 Primer sequences and lengths of amplified fragments》

  提示：宽带有限、当前游客访问压缩模式

本系列图表出处文件名：随高清版一同展现

《基于双重PCR技术的鹿茸及其伪品DNA指纹特征和鉴定》

1. 获取 高清版本忘记账户？点击这里登录

1. 下载图表忘记账户？点击这里登录

（1） 引物设计:查找GenBank中鹿茸线粒体Cytb及COⅠ的已知序列，采用Premier 5.0软件进行引物设计，采用Oligo 6.0引物设计软件进行验证。针对Cytb设计了2对引物（Cytb1和Cytb2），COⅠ设计了3对引物（COⅠ1、COⅠ2和COⅠ3）。碱基序列及扩增的片段长度见表1。（2）PCR反应体系:以提取的鹿茸基因组DNA为模板，灭菌双蒸水作为阴性对照进行PCR反应。反应体系25μL，在150μL PCR反应管中依次加入DNA混合酶12.5μL，Cytb或COⅠ上、下游引物各1μL，模板0.5μL，双蒸水10μL。（3）反应程序:单一PCR:94℃预变性5min，94℃变性30s，退火温度30s，72℃延伸30s，30个循环后于72℃延伸10 min。PCR产物用2%琼脂糖凝胶电泳，90 V、40 min，100~600 bp DNA Marker作参照，凝胶成像分析系统观察和分析结果。（4）双重PCR扩增:在反应体系中加入Cytb及COⅠ2对引物，上、下游引物各1μL，双蒸水8μL，其余条件同单一PCR扩增的反应条件。检测方法与单一PCR扩增的检测方法相同。