《表1 引物和探针信息：一种基因编辑位点特异性PCR方法的开发和应用》

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《一种基因编辑位点特异性PCR方法的开发和应用》

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利用软件Primer Premier 5.0在PAM(protospacer adjacent motif）位点的上下游设计引物组合SP1-cx-F/R（表1），预期扩增产物大小长755 bp。以水稻SP1基因编辑植株的基因组DNA为模板，进行PCR扩增。扩增体系包括10μL 5×Reaction Buffer，1μL10 mmol/L d NTPs，2.5μL 10μmol/L Forward Primer，2.5μL 10μmol/L Reverse Primer，2μL DNA模板，0.5μL DNA Polymerase，加dd H2O到50μL。PCR反应程序为：98℃预变性30 s；35个循环步骤包括98℃变性10 s，68℃退火30 s，72℃延伸30 s；再72℃延伸30 min后，降温至4℃结束。反应结束后将PCR产物取出5μL用于琼脂糖凝胶电泳。经电泳验证条带后，切胶回收目标条带，送测序公司（擎科生物）测序，获得水稻编辑单株SP1基因编辑位点的DNA序列。