《表2 野生型水稻和SP1基因编辑水稻编辑位点特异性PCR方法的检测灵敏度测试》

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《一种基因编辑位点特异性PCR方法的开发和应用》

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将野生型水稻和基因组编辑水稻的基因组DNA分别进行梯度稀释，浓度为80 copies·μL-1、40copies·μL-1、20 copies·μL-1、10 copies·μL-1、5 copies·μL-1、1 copies·μL-1。用梯度稀释的DNA做模板，考察6个引物/探针组合的扩增灵敏度。大于10拷贝的模板，设置4个平行；小于10拷贝的模板，设置10个平行。结果显示，6组DNA模板，当模板量低至1拷贝时，只有1～5个反应有典型扩增曲线，证明模板拷贝数浓度的测量值准确可靠（表2）。野生型引物探针SP1-F3/R3/Pw和基因编辑植株SP1-5引物探针SP1-F3/R3/P5在模板量≥10拷贝时都有扩增曲线，其检测灵敏度为10拷贝；基因编辑植株SP1-1引物探针SP1-F3/R3/P1、SP1-2引物探针SP1-F3/R3/P2、SP1-3引物探针SP1-F3/R3/P3和SP1-4引物探针SP1-F3/R3/P4在模板量≥5拷贝时都有典型扩增曲线，其检测灵敏度为5拷贝。编辑位点特异性PCR与传统转基因产品的实时荧光PCR具有相似的检测极限。