《表2 五个品种基因编辑株系中OsNramp5靶位点的基因型》

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《利用CRISPR/Cas9敲除OsNramp5基因创制低镉籼稻》

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灰色底纹标识的单元格表示该基因型已经分离到去除标记且纯合的植株；其他基因型正在分离纯合植株；，未确定；-，不适用。

先以品种Kasalath为材料试验CRISPR/Cas9系统对OsNramp5基因两个靶位点的编辑效果。结果显示在两个靶位点中均成功创制突变，选择位点1 (CRISPR/Cas9系统中使用U6启动子）作为进一步试验的基因编辑靶位点，扩大试验对象至纯系品种五山丝苗和中早35以及杂种亲本华占和五丰B。在针对靶位点1的试验中，5个品种一共获得97个独立转基因株系，对T0代（转基因当代定义为T0代）植株的测序显示，不同品种基因突变效率不同，突变率（突变转化子数/总转化子数×100%）为39%～90%，平均为58%（表1）。对这5个品种一共56个独立基因编辑株系中的106个突变事件进行了分析，结果显示一共出现了32种突变基因型（图2-A），理论上其中25种突变类型为移码突变，导致蛋白功能失活，7种突变类型（即当缺失或插入的碱基造成的总的碱基变化数为3的整倍数时，包括#05，#07，#12，#13，#17，#22和#24）导致部分氨基酸残基发生改变，蛋白功能是否受影响未知。每个基因编辑株系所携突变基因型见表2。针对靶位点2的基因编辑结果也在表1、表2和图2-B中显示。