《表2 靶位点鉴定引物：敲除RIG-I基因的PK-15细胞系的建立及RIG-I对猪圆环病毒2型感染的作用》

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《敲除RIG-I基因的PK-15细胞系的建立及RIG-I对猪圆环病毒2型感染的作用》

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转染后36～48 h，流式分选表达增强型绿色荧光蛋白（enhanced green fluorescent protein，EGFP）的单个细胞于96孔板中。1周后，取部分细胞，按照Tissue DNA Kit说明书提取基因组DNA进行PCR鉴定，初步筛选敲除RIG-I基因的PK-15细胞。选择疑似敲除的细胞基因组DNA经测序引物（RIG-I-L）进行PCR扩增后，测序分析，引物序列见表2。提取细胞总蛋白，经SDS-PAGE电泳后转膜、封闭，分别与RIG-I(1∶800）和β-actin(1∶1000）抗体进行孵育，洗膜，孵育二抗（1∶15 000）后，红外荧光扫描仪扫膜，筛选稳定敲除RIG-I基因的PK-15细胞株。