《表2 含酶切位点的特异性引物序列》

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《水稻Ca~(2+)依赖性核酸酶融合蛋白的构建、纯化及酶活性分析》

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根据水稻全长基因序列分别设计含有酶切位点的引物（表2），以含有目的基因的重组质粒作为模版，利用高保真酶进行PCR扩增并回收纯化，将纯化后的目的片段16℃连接至pMD18-T载体中，转化大肠杆菌JM109，选取阳性单克隆进行双酶切鉴定，鉴定正确后保存菌株并提取质粒，送测序。再将测序正确的重组质粒与实验室保存的pGEX-6p-3载体质粒进行双酶切，琼脂糖电泳并回收。利用T4连接酶对载体和目的基因进行16℃过夜连接，转化大肠杆菌JM109，选取单克隆进行酶切鉴定，对阳性克隆保存菌株并提取质粒，获得重组质粒pGEX-6p-3-OsCaN1、pGEX-6p-3-OsCaN3、pGEX-6p-3-OsCaN4。