《表1 插入位点引物序列：转BtCry1Ac欧洲黑杨的外源基因插入位点分析及特异性检测》

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《转BtCry1Ac欧洲黑杨的外源基因插入位点分析及特异性检测》

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2019年4月采集转基因杨树及对照新鲜叶片并利用CTAB法提取DNA，以BtF、Bt-R为引物PCR鉴定转基因材料。采用hi TAIL-PCR技术扩增T-DNA侧翼序列，其中简并引物LAD1、LAD2、LAD3、LAD4的序列参考文献（Liu et al.，2007），根据载体设计左右边界引物LB-0A/LB-1A/LB-2A、RB-0A/RB-1A/RB-2A （表1），并进行3轮PCR反应。LB-0A/RB-0A分别与LAD1、LAD2、LAD3、LAD4进行第1轮PCR；将第1轮PCR产物稀释40倍为模板，LB-1A/RB-1A与AC1为引物进行第2轮PCR；将第2轮PCR产物稀释10倍为模板，LB-2A/RB-2A与AC1为引物进行第3轮PCR。具体反应程序参照文献（Liu et al.，2007）。将第2、3轮PCR产物经1%凝胶电泳，利用Takara切胶回收试剂盒回收第3轮产物，连接p MDTM19-T Vector，送北京赛默飞世尔公司测序。