《表3 转座子插入位点分析》

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《Dietzia菌随机插入突变体文库的构建及功能基因筛选》

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↓表示相对于野生型，突变株降解率下降.

经过转座子插入位点鉴定，在M6A、M7A和M81C中，转座子插入位点分别在Contig8-orf00068的-6 bp处，Contig8-orf00074的495 bp处和Contig8-orf00071的681 bp处.通过KEGG和SWISS等数据库注释，Contig8-orf00068编码铁氧化还原蛋白（Ferredoxin，表3)，Contig8-orf00074编码铁氧化还原蛋白还原酶（Ferredoxin reductase，表3)，Contig8-orf00071编细胞色素P450类CYP153烷烃羟化酶（表3）.这3个基因处于同一个基因簇上.烷烃羟化酶CYP153是细胞色素P450家族中最重要的正构烷烃羟化酶之一.这3个基因突变后都可能会影响整个基因簇的完整功能，从而影响细胞对正十六烷的羟化作用.同时，通过对现有的机制[9，28]进行研究，发现在Dietzia sp.DQ12-45-1b中，细胞色素P450类CYP153烷烃羟化酶可能与膜整合烷烃羟化酶AlkB共同使用一套电子传递体系.在M9A中，转座子插入位点为Contig46-orf01661的783 bp处.通过KEGG和SWISS等数据库注释，Contig46-orf01661编码ABC转运蛋白（ABC transporter ATP-binding protein）；通过与NCBI数据库进行比对，发现Contig46-orf01661与Pseudopropionibacterium massiliense编码ABC转运蛋白的基因序列具有最高的相似性，达到99%.系统发育分析（图4B）表明，Contig46-orf01661与Dietzia菌和Actinomadura菌的序列聚为一簇.ABC转运蛋白是一类重要的跨膜运输蛋白，依靠三磷酸腺苷（ATP）水解产生的能量实现底物在细胞内外的跨膜运输.Contig46-orf01661在基因组上位置的下游是一个铁转移基因簇，故而推测该基因与DQ12-45-1b的铁转运相关.烷烃降解体系中的许多酶促反应需要铁元素的参与.该基因突变后，可能会导致细胞的铁元素转移能力的下降，从而导致细胞内铁饥饿，降低细胞对正十六烷的降解利用效率.在M6B中，转座子插入位点为Contig46-orf04630的173 bp处，Contig46-orf04630在KEGG和SWISS等数据库中无可信注释.经过NCBI数据库比对发现Contig46-orf04630相似性高的结果均为假定蛋白，其功能仍需进一步研究.系统发育分析（图4C）表明，Contig46-orf04630与来源于Dietzia和红球菌的序列聚为一簇.