《表1 本实验所用引物：利用mini-Tn10转座子文库筛选鳗弧菌M3表型发生变化的基因》

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《利用mini-Tn10转座子文库筛选鳗弧菌M3表型发生变化的基因》

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根据Lee等（2008）的方法确定转座子插入突变子的数量，具体步骤：鳗弧菌M3 rpoB基因为单拷贝基因，选取其作为内参基因，neoR基因为转座子特有，选取其为目的基因，根据引物rpoB-for/rev、neo-for/rev（表1）扩增rpoB和neoR片段。连接rpoB片段和neoR片段，构建重组载体质粒，根据该质粒计算DNA拷贝数，并以该重组质粒为模板，rpoB-SYBR-for/rev、neoR-SYBR-for/rev为引物，制作标准曲线，得到扩增效率E值（ErpoB和EneoR），再以突变子DNA为模板，进行相对定量PCR，得到ΔCtrpoB和ΔCtneoR，由公式计算转座子插入个数。