《表2 本研究中筛选出来的8种分子标记技术单引物及转座子扩增引物对》

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《花生DNA的五种改良CTAB提取方法的比较分析及其应用》

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本研究一共使用了8种基于单引物扩增反应的分子标记技术对采用5种改良CTAB法所提取出来的花生基因组DNA的质量进行扩增验证，最终从中筛选出扩增效果较好的单引物（表2），其序列信息主要来源于前人的研究文献（Williams et al.，1990；Zietkiewicz et al.，1994；Kang et al.，2002；Collard and Mackill，2009；Kalendar et al.，2010；Xiong et al.，2011b；Xiong et al.，2013；Singh et al.，2014）。PCR扩增采用统一反应体系:基因组DNA模板1μL，10×PCR Buffer 2μL，2.5 mmol/L的dNTPs 0.5μL，10μmol/L的单引物1μL，5U/μL的Taq酶0.2μL，ddH2O 15.3μL；除不同分子标记技术的扩增退火温度不同外（RAPD技术和BPS技术的扩增退火温度为40℃，其它几种分子标记技术的扩增退火温度都为50℃），8种分子标记技术的PCR统一扩增程序:94℃4 min；94℃30 s，适合温度退火1 min，72℃90 s，计35个循环，最后72℃10 min；iPBS-PCR扩增程序:94℃5 min；94℃1 min，50℃1 min，72℃2 min，计30个循环，最后72℃10 min。PCR扩增结束后，往PCR产物中加入4μL上样缓冲液并充分混匀，取6μL产物在1.5%琼脂糖凝胶（1×TAE）中电泳分离，凝胶经EB染色后在凝胶成像系统上观察照相和保存。