《表6 构建载体所用的酶切位点》

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《水稻育性调控相关基因RNAi载体的构建及其表型鉴定》

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将上述正确测序的克隆载体用相应的酶进行酶切（表6），分别切出长片段Vector（V，含目的基因片段的T载体）和短片段Insert（Ⅰ，目的片段）。再将两个片段分别纯化回收，然后用T4连接酶连接后涂板，挑取白色克隆养菌，提质粒后用相应的酶进行酶切。将酶切正确的质粒对应的菌液送测序。测序正确的质粒，含正反RNAi目标区段，即中间表达载体构建成功。可继续进行表达载体的构建。用相同的酶（PstⅠ/NcoⅠ）同时酶切中间表达载体和HPE203-1（实验室所用的表达载体）。然后胶回收、连接、涂板、养菌、提质粒和酶切验证。将电泳结果正确的质粒对应的菌液送测序。测序正确即为最终得到的含正反RNAi目标区段的表达载体，构建载体模式（图4）。