《表4 筛选9个基因的相关信息》

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《水稻育性调控相关基因RNAi载体的构建及其表型鉴定》

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基于文献和基因注释等相关依据（Komori et al.，2004；Kazama et al.，2008；Ohnishi et al.，2011；Abiko et al.，2013；Koiso et al.，2017），筛选水稻在生殖发育过程中的9个重要调控基因（表4）。其中，AT61、AT62和AT63 3个RNAi表达载体靶标花粉育性的调控，AT64、AT65和AT66 3个RNAi表达载体靶标卵细胞发育的调控，AT67、AT68和AT69 3个RNAi表达载体靶标合子胚发育的调控。利用NCBI（https://www.ncbi.nlm.nih.gov/）网站Primer designing tool在线工具进行引物设计。在GenBank（https://www.ncbi.nlm.nih.gov/genbank/）网站上，查询各基因的全长序列，并在NetGene2网站上预测各基因5'UTR（Untranslated region）启动子序列。利用软件Primer Premier 5.0设计引物（表5）分别用于扩增各基因。以Ilmibyeo基因组cDNA为模板，扩增各基因目的片段。PCR的程序为：95℃3 min（预变性）；95℃10 s（变性），63℃10 s（退火），72℃15 s（延伸），35个循环；72℃5 min（延伸），4℃（保存）（各基因的引物不同，退火温度也有所不同(表5）)。PCR产物使用1%琼脂糖凝胶电泳检测，并使用DNA回收试剂盒纯化目的条带，取3μL纯化产物进行电泳检测。检测结果无误后，用T4 DNA连接酶将目的片段与y T&A克隆载体连接转化DH5α感受态细胞。次日选择白斑进行PCR和培养，比对条带大小，验证后送华大基因测序。测序正确即得到重组克隆载体（朱骞等，2018b）。