《表1 RT-qPCR反应引物设计》

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《外源激素对水稻籽粒碳氮代谢相关酶基因表达影响》

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根据基因登陆号从NCBI上搜索并获取淀粉合成相关酶同工型基因OsGBSS1、OsSSSI、OsISA1、OsAGPL2、OsSBEⅡb、OsRSR1和谷氨酰胺合成酶同工型基因OsGS1；3以及Ubi5内参基因序列，然后通过BLAST确定各序列CDS区准确性。分别将各基因CDS区序列输入Primer Premier 5.0软件中，限定所需引物和产物长度等获得一系列引物，从中选取长度合适且无错配、发卡结构等引物，委托上海生工生物有限公司合成引物（见表1）。选用表1列出引物对灌浆不同时期各处理籽粒样品cDNA检测荧光定量PCR。本试验药品选用愚公生命科技有限公司提供的NOVA?Taq SYB?Green qPCR Premix，仪器使用Roche LightCyclerTM。参照DelteDelteCt法分析基因相对转录表达量[10]，（1）ΔCt=Ct（目的基因）-Ct（内参基因）；（2）ΔΔCt=ΔCt（试验组）-ΔCt（对照组）；（3）基因表达量=2-ΔΔCt。