《表1 RT-qPCR反应引物序列》
根据Trizol方法,取部分小鼠肝脏组织进行RNA的提取[12]。将提取的RNA使用核酸检测仪(Nanodrop one,Thermo,USA)测定浓度后,将其稀释至适宜浓度,按照HiFiScript gDNA Removal cD-NA Synthesis Kit(CWBIO,China)的参考说明开展相关实验操作,将RNA反转录为cDNA。将cDNA模版,基因(HSP70,MT1和β-actin)引物,MilliQ水和UltraSYBR酶(CWBIO,China)的混合液体在荧光定量PCR仪(LightCycler96,Roche,Switzerland)作用下完成HSP70和MT1基因表达的检测分析。RT-qPCR反应体系为50μL。反应条件为:95℃预变性10 min,95℃变性10 s,56~64℃退火30 s,72℃延伸32 s,循环40次,所有测量重复3次。基因相对表达采用2-△△Ct法计算(△△Ct=实验组(Ct目的基因-Ct管家基因)-对照组(Ct目的基因-Ct管家基因))[13]。在使用方法之前,确定目的基因和管家基因的扩增效率基本一致。β-actin基因作为内参基因。引物序列见表1。
图表编号 | XD00162391400 严禁用于非法目的 |
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绘制时间 | 2020.05.10 |
作者 | 王文倩、陈浩浩、傅晓艳、蒋进展、潘晓明、张志琴 |
绘制单位 | 金华职业技术学院、金华职业技术学院、金华职业技术学院、金华职业技术学院、金华职业技术学院、金华职业技术学院 |
更多格式 | 高清、无水印(增值服务) |