《表1 RT-qPCR反应引物序列》

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《循环miRNAs评估颈动脉粥样硬化斑块稳定性的临床意义》

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引物设计及合成委托上海吉玛制药技术有限公司进行，各基因的引物序列见表1。以Trizol试剂（美国Invitrogen公司）、氯仿提取血浆总RNA，异丙醇沉淀回收RNA，75%乙醇洗涤RNA沉淀，焦炭酸二乙酯（DEPC）水溶解，得到RNA溶液。利用提取的总RNA，加入特异性引物，用DEPC水定容至12μl，70℃温浴5min，迅速置冰上10s。离心，加入4μl反应缓冲液、2μl dNTP、1μl RNA酶抑制剂、1μl RevertAidTMM-MuLV逆转录酶（加拿大Fermentas公司），37℃温浴5min，42℃温浴1h，70℃温浴10min后终止反应。Q-PCR利用SYBR GreenⅠPCR试剂盒（上海吉玛制药技术有限公司）完成。PCR反应条件:95℃10min；然后进入95℃15s，60℃1min的循环（共40次），每个反应有3次重复。以5S rRNA作为内参基因，采用2-ΔΔCt方法计算相对表达量，各组相比健康对照组的表达倍数差异采用log2转换。