《表3 RPA-LFD引物和探针》

  提示：宽带有限、当前游客访问压缩模式

本系列图表出处文件名：随高清版一同展现

《布鲁氏菌RPA-LFD检测方法的建立》

1. 获取 高清版本忘记账户？点击这里登录

1. 下载图表忘记账户？点击这里登录

以筛选出的最佳引物按照TwistAmpnfo说明书设计RPA-LFD引物和探针（表3），以拷贝数为106拷贝/μL的质粒标准品为模板，在预添加nfo酶的冻干PCR管中加入如下预混液：上、下游引物各2.1μL、探针0.6μL、Primer Free Rehydration buffer（再水合缓冲液）29.5μL、模板和水13.2μL。在倒置的管盖中加入2.5μL Mg OAc（醋酸镁），盖上管盖放入金属浴中，利用方阵法对反应温度（20℃、25℃、28℃、30℃、35℃、37℃、39℃、40℃、42℃）、时间（5 min、10 min、15 min、20 min、25 min、30 min）、引物探针浓度（1 pmol/μL、5 pmol/μL、10 pmol/μL、25 pmol/μL、50 pmol/μL）等条件优化，反应结束后取反应液2μL加入98μL LFD缓冲液中混合静止2 min，将侧流层析试纸条插入混合缓冲液中静止2 min～3 min，按照试纸条试剂盒说明书判定结果。