《表1 RPA-LFD方法引物及探针核苷酸序列》

  提示：宽带有限、当前游客访问压缩模式

本系列图表出处文件名：随高清版一同展现

《动物A型流感病毒RPA-LFD可视化检测方法的建立》

1. 获取 高清版本忘记账户？点击这里登录

1. 下载图表忘记账户？点击这里登录

根据NCBI中登录的近5年不同基因型的流感病毒株序列，通过clustalW软件（http://www.ebi.ac.uk/Tools/msa/clustalo/）比对选择IV M基因的相对保守区域，设计多对引物和探针，由上海生工股份有限公司合成及标记。采用设计的引物和探针，按TwistAmp nfo试剂盒说明书，在PCR反应管中添加Rehydration Buffer 29.5μL，LF Probe 0.6μL（10μmol/L），上下游引物各2.1μL（10μmol/L），dd H2O 12.2μL，将所有组分混合后，加入预添加nfo酶的PCR反应管中，混匀后加入1μL模板（H9N2 IV cDNA为阳性模板，去离子水为阴性模板），最后加入2.5μL醋酸镁，在37℃条件下反应25 min。通过2%琼脂糖凝胶电泳检测反应产物，通过电泳条带初步筛选出合适的引物和探针（表1，图1）。将筛选出的上下游引物在NCBI blast数据库进一步验证和预测。