《表2 PePIF3-1和PePIF3-2的实时荧光定量引物》

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《杨树PePIF3基因的克隆与表达分析》

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对‘南林895’杨不同组织器官进行表达特异性分析，分别是幼叶、成熟叶、柄、茎和根。采集样品后用液氮速冻，提取样品总RNA，分别测取浓度，将不同组织器官的RNA浓度定到相同数值，再反转录为cDNA，然后以cDNA为模板进行荧光定量PCR分析PePIF3的表达（徐向东等，2018）。以ACTIN为内参，设计相关引物（表2）（李瑞玲等，2018）。20μL反应体系：10μL 2×ChamQ SYBR qPCR Master Mix，Primer 1（10μmol/L）、Primer 2（10μmol/L）和50×ROX Reference Dye各0.4μL，2μL c DNA，6.8μL的ddH2O。反应程序：95℃30 s；95℃10 s，60℃30 s，40个循环；95℃15 s，60℃60 s，95℃15 s。所有试验分别进行3次生物学重复与技术重复。采用2-ΔΔCt计算方法进行数据分析（罗静静等，2018）。