《表2 实时荧光定量PCR的引物序列》

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《EZH2对先天性巨结肠结肠组织中GFRα1表达的影响》

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注:[GFRα1]胶质细胞源性神经营养因子受体α1；[EZH2]果蝇Zeste基因增强子人类同源物2；[GAPDH]人3-磷酸甘油醛脱氢酶。

将组织块直接放入研钵中，加入少量液氮并迅速研磨，待组织变软，再次加入液氮后研磨，重复3次。然后将粉碎后组织按每100?mg加入1?mL?Trizol（Invitrogen，?CA，?USA），转移入离心管并置于冰上，用电动匀浆器充分匀浆1～2?min。以4℃、12?000?rpm离心5?min，弃沉淀后按每毫升Trizol加入200?μL氯仿，振荡15?s混匀后室温放置10?min。后续按常规Trizol法抽提取RNA。使用SuperScriptⅡreverse?transcriptase试剂盒（Invitrogen）将RNA逆转录成cDNA。采用SYBR?Green荧光染料法进行实时荧光定量PCR（ABI?Prism?7500，?CA，?USA），引物序列见表2。以人3-磷酸甘油醛脱氢酶（GAPDH）基因为内参照，比较CT值法（2-ΔΔCt法）测定目的基因的相对表达量。