《表1 PePIF3-1和PePIF3-2的特异性引物》

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《杨树PePIF3基因的克隆与表达分析》

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采用天根生化科技有限公司的RNAprep Pure多糖多酚植物总RNA提取试剂盒（DP441）提取杨树总RNA。使用Vazyme公司HiScript誖IIReverseTranscriptase试剂反转录成cDNA。根据Phytozome中查询序列PtPIF3的CDS序列，设计PePIF3的5'端及3'端特异引物（表1）。采用北京擎科新业生物技术有限公司的Golden Star T6 Super PCR Mix，50μL体系，包括：Mix（green）45μL，Primer-F（10μmol/L）2μL，Primer-R（10μmol/L）2μL，Template DNA 1μL。梯度PCR筛选最适退火温度为60℃，其它PCR反应程序同Mix（green）说明书，4℃保存。PCR产物用AxyPrep DNA凝胶回收试剂盒切胶回收，纯化后将产物连接到pEASY誖-T3克隆载体后转化至大肠杆菌Trans1-T1感受态（李瑞玲等，2018），利用IPTG和X-gal进行蓝白斑筛选。无菌条件下挑取白色单克隆置于3 m L液体LB培养基中（含有100μg/m L Amp+，1:1 000），200 r/min、37℃过夜培养。以特异性引物进行PCR检测，将筛选出的阳性克隆菌液委托擎科公司测序。