《表1 BmRpt4 sgRNA位点合成及检测引物》

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《家蚕BmRpt4基因在翅膀发育中的功能研究》

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根据CRISPR/Cas9靶点的设计原则5′-GGNN18NGG-3′，利用在线软件CRISPR direct(http://crispr.dbcls.jp/）对BmRpt4基因ORF区进行特异靶点的设计（Wang et al.，2013；Zhang et al.，2013）。共设计两个sgRNA位点序列，并在位点上下游约100 bp位置各设计一对引物，将其克隆测序，检测sgRNA位点序列在基因组水平上是否有突变。所用引物序列见表1，引物合成和DNA序列测定均由上海生工生物工程有限公司完成。