《表2 sgRNA切割效率检测引物》

  提示：宽带有限、当前游客访问压缩模式

本系列图表出处文件名：随高清版一同展现

《利用CRISPR/Cas9技术构建KMT2D基因敲除的人胚胎干细胞系》

1. 获取 高清版本忘记账户？点击这里登录

1. 下载图表忘记账户？点击这里登录

为检测sgRNA的切割效率，采用lipo3000脂质体转染法，将之前构建好的sgRNA与Cas9共表达的7个载体分别转染至293T细胞中，同时再单独转染等量的GFP质粒观察转染效率。转染后6～8 h换液，细胞转染36h后收集细胞，加入自制的含NP40的裂解液，反复吹打混匀，56℃2 h，99℃10 min。然后以细胞裂解后的产物为模版，用设计好的引物和摸索好的条件PCR。引物的名称及序列见表2。