《表1 针对sgRNA1和sgRNA2脱靶位点设计的PCR引物序列》

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《应用CRISPR/Cas9和Cas9-D10A建立Nsun5基因敲除小鼠模型并分析脱靶效应》

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N5:Nsun5；OT:off-target；sg1:sgRNA1；sg2:sgRNA2。

为检测切割效果，在sgRNA作用靶点上下游设计PCR引物。msNsun5-E3 For:5′-GCTTGTCTCT-GCCTCTTG-3′和msNsun5-E3 Rev:5′-CTAGAAGT-CACAGTGGTCAA-3′。为检测脱靶效应，根据文献报道的sgRNA可以忍受1～3个碱基的不完美互补配对从而对基因组进行切割[12]，分别选取了sgRNA1和sgRNA2 10个最容易发生脱靶效应的位点进行检测，脱靶位点鉴定引物见表1。