《表3 sgRNA基因编辑突变类型检测》

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《利用CRISPR/Cas9鉴定玉米发育相关基因ZmCen》


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次年种植T0代种子,继续自交并结实,收获转基因植株。检测T1代转基因植株Zm Cen的突变情况,同时对T1代进行PCR扩增,与T0代产物测序比对分析(图3),结果T0代和T1代均发生不同类型的碱基插入、缺失及替换。其中T0代最大缺失37bp(图3:T0-4);在62株T1代植株中,有10株发生单碱基插入突变,占总检测植株(62株)的16.13%,主要是碱基C的插入;11株发生碱基缺失突变,占总检测植株的17.74%,19株发生碱基替换突变,大部分为单碱基T的插入,占总检测植株的30.64%。其中纯合突变有“3”株,纯合突变率为5%(表3)。