《表1 试验中使用的引物：小麦转录因子基因TaNAC67参与调控穗长和每穗小穗数》

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《小麦转录因子基因TaNAC67参与调控穗长和每穗小穗数》

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根据克隆的Ta NAC67-6A、Ta NAC67-6B、TaNAC67-6D基因组序列，利用Primer Premier 5.0软件设计基因组特异引物NAC67-6AsF/R、NAC67-6BsF/R和NAC67-6DsF/R（表1），分别扩增A、B、D基因组全长序列。以多态性分析群体基因组DNA为模板，用高保真DNA聚合酶TransStart FastPfu进行PCR扩增。PCR体系包括5×TransStart FastPfu buffer 6μL，2.5mmol L–1 dNTPs 2.4μL，TransStart FastPfu DNA Polymerase 0.6μL，正、反向引物（10μmol L–1）各1.5μL，50 ngμL–1模板DNA 2μL，用ddH2O补至30μL。PCR扩增程序为95℃5 min；95℃1 min，55～60℃45 s，72℃3 min，35个循环；72℃，10 min。用1.2%琼脂糖凝胶分离PCR产物，目的片段经回收纯化后，连接pEASY-Blunt zero载体，挑单克隆，提取质粒测序。