《微生物生理代谢实验技术》

前言1

编者的话1

第一部分 微生物高分子组分的分离、纯化和鉴定1

Ⅰ．细菌细胞壁的分离和纯化1

实验1-1 革兰氏阳性细菌细胞壁的分离、纯化和鉴定5

实验1-2 革兰氏阴性细菌细胞壁外膜层的分离和纯化10

Ⅱ．核染色体DNA13

实验1-3 核染色体DNA13

Ⅲ．质粒DNA21

实验1-4 质粒DNA的提取和纯化(一)氯化铯-溴化乙锭密度梯度法22

实验1-5 质粒DNA的提取和纯化(二)碱变性法26

实验1-6 质粒DNA的提取和纯化(三)热变性法27

实验1-7 质粒DNA的提取和纯化(四)酸酚法29

实验1-8 质粒DNA的提取和纯化(五)柱层析法纯化质粒DNA32

实验1-9 质粒DNA的鉴定(一)琼脂糖凝胶电泳35

实验1-10 质粒DNA的鉴定(二)分子量的测定(附：质粒DNA含量的测定)40

实验1-11 质粒DNA的鉴定(三)质粒DNA的电镜观察44

实验1-12 质粒DNA的鉴定(四)质粒DNA生物学活性的测定46

实验1-13 质粒DNA的鉴定(五)质粒DNA克隆外源基因47

Ⅳ．RNA的分离和纯化49

实验1-14 mRNA的分离和纯化50

实验1-15 tRNA的分离和纯化53

实验1-16 16S和23SrRNA的分离和纯化57

实验1-17 RNA含量的测定58

第二部分 微生物的生长61

实验2-1 连续培养技术61

实验2-2 微生物细胞的同步培养65

实验3-1 紫色非硫细菌的分离纯化71

第三部分 独特生理代谢类型微生物的研究方法71

Ⅰ．光合细菌71

实验3-2 光合细菌的培养75

实验3-3 光合细菌的菌种保藏77

实验3-4 光合细菌的色素缺陷型诱变79

Ⅱ．化能自养细菌83

实验3-5 用氧电极法测定细菌呼吸链的组成和被氧化底物的电子进入呼吸链的部位83

实验3-6 氧电极的标定，细菌呼吸速率和硫杆菌氧化硫代硫酸的化学计量学的测定91

实验3-7 用差示光谱法检测硫杆菌的呼吸链组分97

实验3-8 用连续培养(恒化)法测定硫杆菌的生长得率和最大生长得率105

Ⅲ．产甲烷菌119

实验3-9 分离产甲烷菌前的准备工作123

实验3-10 产甲烷菌的分离、转移和纯化133

实验3-11 产甲烷菌的荧光检测141

实验3-12 沼气的气相色谱分析144

实验3-13 挥发酸的气相色谱分析151

Ⅳ．嗜盐菌158

实验3-14 嗜盐菌的培养、分离和菌种保藏159

实验3-15 紫膜的分离和提取164

实验3-16 BR分子的光化学反应及其测量方法168

实验3-19 光驱动的BR质子泵在不同体系中效率的检测174

第四部分 微生物的代谢调节185

实验4-1 大肠杆菌β-半乳糖苷酶的诱导合成和分解代谢产物阻遏185

实验4-2 天冬氨酸、苏氨酸和甲硫氨酸对赖氨酸生物合成的代谢调节190

实验4-3 地中海诺卡氏菌的谷氨酰胺合成酶199

实验4-4 吸水链霉菌井冈变种谷氨酰胺合成酶的共价键调节205

实验4-5 无机磷对力复霉素合成的调节210

实验4-6 硝酸盐对力复霉素产生菌菌体脂肪含量的调节作用218

实验4-7 共合成方法在抗生素生物合成中的应用222

实验4-8 抗生素生物合成中间产物的定量生物测定方法226

第五部分 微生物的遗传育种技术231

Ⅰ．标记菌种的分离231

实验5-1 大肠杆菌营养缺陷型的筛选232

实验5-2 利用转座子的插入筛选大肠杆菌的营养缺陷型236

实验5-3 枯草杆菌抗药性标记(抗利福平突变型)的筛选239

实验5-4 红霉素链霉菌无活性突变型的筛选244

实验5-5 酵母菌营养缺陷型的筛选247

实验5-6 青霉菌营养缺陷型菌株的筛选251

Ⅱ．氨基酸产生菌的遗传育种257

实验5-7 氨基酸缺陷型的筛选258

实验5-8 产氨基酸抗反馈调节突变株的选育268

Ⅲ．原生质体融合技术277

实验5-9 芽孢杆菌属种间原生质体的融合277

实验5-10 芽孢杆菌属种间原生质体的转化281

实验5-11 链霉菌原生质体制备、再生和融合284

实验5-12 酵母细胞的原生质体融合291

实验5-13 霉菌原生质体的分离、再生和融合296