《表1 本研究中涉及到的PCR引物》

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《杨梅糖基转移酶UGT71AN1的克隆与功能鉴定》

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根据杨梅转录组数据分析结果，选取候选糖基转移酶基因Unigene设计特异性引物用于候选糖基转移酶全长基因cDNA的克隆，引物设计如表1所示。用引物UGT71AN1-5进行RNA反转录合成c DNA，RT-PCR反应体系含有KAPA HIFI Hotstart Ready Mix溶液25μl，引物UGT71AN1-1和UGT71AN1-4（10μmol/L）各2μl，cDNA模板1μl，用ddH2O补足至50μl。反应程序为预变性94℃5 min；变性94℃50 s；退火50℃1 min，延伸72℃1 min 30 s，运行30个循环；延伸72℃10 min。再以第一轮PCR产物为模板，使用引物UGT71AN1-2和UGT71AN1-3进行第2轮PCR扩增，然后把扩增的DNA片段亚克隆到大肠杆菌表达载体pTWIN1B（在表达载体pTWIN1基础上进行多克隆位点的修饰）[10]，利用菌落PCR方法筛选正确的阳性克隆进行DNA测序验证。