《表1 神经干细胞q RT-PCR引物序列》

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《Shh通路介导损伤后反应性星形胶质细胞获得干细胞潜能》

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将各组细胞按照每皿1.0×105/mL密度接种，培养24 h后待细胞贴壁，提取样本m RNA，使用罗氏（Rocke）反转录试剂盒反转录为cDNA。在荧光定量PCR仪中检测神经干细胞相关基因的表达。内参与检测样本均设置3个复孔，全程冰上操作。q RT-PCR结果分析保证3复孔同Ct值相差-0.3～0.3，取复孔平均值以减少误差，以β-actin作为内参。神经干细胞相关基因引物序列见表1。PCR反应条件为：95℃预变性10 min；95℃变性15 s、60℃退火延伸1 min，40个循环。以β-actin作为内参，应用7300 system software分析检测数据。ΔΔCt=（Ct目的基因-Ct内参基因）干预组-（Ct目的基因-Ct内参基因）对照组，计算2-ΔΔCt值为目的基因的相对表达水平。