《表1 质粒构建引物序列信息》

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《AGR3在乳腺癌细胞中的功能研究》

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Forward primer-1和Reverse primer-1分别表示构建pCDH-p-3×flag-AGR3-HA的上下游引物；Forward primer-2和Reverse primer-2分别表示构建p LVX-ZsGreen-shAGR3的上下游引物

过表达AGR3质粒以乳腺癌细胞系T47D的c DNA为模板，利用PCR法扩增出含有3×flag标签的AGR3编码序列（引物见表1），用限制性内切酶Nhe1、BamH1对扩增序列以及质粒空载体pCDH-CMV-MCS-EF1-Puro（pCDH）进行双酶切，并回收纯化，纯化后的产物进行连接并转化到DH5α感受态宿主菌，接种于固体LB培养板，选取单克隆菌落接种于LB液体培养基进行扩增，提取质粒验证，从而获得重组过表达质粒pCDH-p-3×flag-AGR3-HA；降表达AGR3质粒将引物退火（引物见表1），用限制性内切酶EcoR1、BamH1对质粒空载体pLVX-ZsGreen-Neo进行双酶切，与退火引物直接连接，转化DH5α感受态宿主菌，最终提取质粒并验证，获得pLVX-ZsGreenshAGR3质粒。