《表1 引物信息:敖汉细毛羊Noggin基因质粒的构建及其在成纤维细胞中表达量的研究》

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《敖汉细毛羊Noggin基因质粒的构建及其在成纤维细胞中表达量的研究》


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扩大培养转染成功的单细胞,细胞在培养皿底部长到95%时,每个板加TRIZol(Roche)试剂3 mL,细胞裂解后进行RNA提取。RNA提取完成后,测定浓度和纯度符合标准后将其反转录成cDNA。通过Primer Premier 5.0软件设计Noggin和GAPDH基因的引物序列见表1。实时荧光定量PCR反应程序:95℃预变性7 min;95℃变性40 s,60℃退火40 s,72℃延伸30 s,共45个循环。样品各进行3次重复,采用Ct(2-ΔΔCt)值法计算Noggin相对于内参基因GAPDH的表达量。利用SPSS17.0软件中t检验对数据进行分析。