《表1 构建质粒所用引物:蓝细菌光敏色素Alr1966GAF2及其突变体的表达与光化学性质研究》

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《蓝细菌光敏色素Alr1966GAF2及其突变体的表达与光化学性质研究》


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以鱼腥藻基因组为模板,以P1、P2为引物(表1),对alr1966gaf2进行体外扩增,扩增程序为:94℃预变性240 s;94℃变性60 s;48℃退火60 s;72℃延伸60 s;共循环30次;最后72℃延伸300 s。经检测,扩增产物大小为480 bp。进一步将alr1966gaf2克隆到pET-30a(+)载体中,获得表达质粒pET-alr1966gaf2。以pET-alr1966gaf2为模板,P3、P4为引物,利用定点突变技术体外扩增alr1966gaf2(C72A)基因片段,构建突变体表达质粒pET-alr1966gaf2(C72A)。