《表1 qRT-PCR实验中的各基因引物》

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《沉默XIST通过上调miR-488-3p抑制宫颈鳞状细胞癌细胞的顺铂耐药性》


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收集细胞,TRIzol法抽提细胞总RNA,M-MLV逆转录试剂盒合成cDNA,miRNA逆转录使用mi Script逆转录试剂盒合成。cDNA特定RNA产物的产量检测使用SYBRGreen Master Mix、GAPDH(mRNA)和RUN6(miRNA)为内参对特定产物表达量进行标准化处理。反应体系(20μl):10μl SYBR,2.0 ng模板cDNA,正反向引物浓度均为20μmol·L-1,体积为0.8μl,最终使用灭菌蒸馏水加至20μl。PCR过程:40个循环,94℃1 min,54℃1 min,聚合72℃1 min,延伸72℃7 min。相对表达使用公式2-ΔΔCt计算。qRT-PCR反应引物见表1。