《表2 不同引物扩增最佳退火温度》

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《中麻黄叶绿体DNA序列不同引物扩增条件的筛选》

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注:“-”指未能测出退火温度。

扩增体系（25μL）:按初期配比依梯度进行体系调整，DNA模板量为0.5～2.0μL，正向引物（F-Primer）量为0.5～2.0μL、反向引物（R-Primer）量为0.5～2.0μL、10×Ex Taq buffer量为1.5～2.5μL、Taq DNA酶量为0.20～0.75μL、Mg2+量为1.0～2.5μL、dNTP量为0.30～0.75μL、ddH2O量为12.5～20.5μL；扩增程序:94℃预变性3～5 min，94℃变性30～60 s，根据不同引物的退火温度复性45～90 s，72℃延伸2～5 min，30～40个循环，72℃延伸7 min，4℃保存结束反应。用筛选出的23条引物按其最佳退火温度（表2）逐条对16个不同居群样本基因组DNA进行PCR扩增。