《表3 章姬49条引物的退火温度及扩增》

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《草莓组培苗遗传稳定性的ISSR检测及DNA甲基化变异》

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流程参照刘鹏飞等（2016）的方法进行。酶切体系:用Eco RⅠ/HpaⅡ和Eco RⅠ/MspⅠ两组酶（Fermentas），对基因组DNA进行双酶切。连接体系:取酶切产物加入Eco RⅠ接头和HpaⅡ或MspⅠ接头（表3），并添加T4 DNA Ligase、10×Ligase buffer和ddH2O进行连接。预扩增反应体系:加入连接产物、E00预扩增引物、HM00预扩增引物（表5）、2×PCR MasterMix（天根生化科技有限公司）及ddH2O，混匀。预扩增程序（刘鹏飞等，2016）:94℃预变性2 min；94℃变性30 s，56℃退火30 s，72℃延伸2 min，35个循环；72℃延伸10 min；4℃保存。将预扩增产物稀释50倍用于选择性扩增模板。选择性扩增体系:加入预扩增稀释产物、2×PCR MasterMix、ddH2O以及选择性扩增引物Eco RⅠ和HpaⅡ/MspⅠ（表3），混匀。选择性扩增程序:94℃预变性30 s；94℃变性30 s，65℃退火30 s，72℃延伸2 min，每个循环减少0.7℃（13个循环）；94℃变性30 s，56℃退火30 s，72℃延伸2 min（25个循环）；72℃延伸10 min；4℃保存。