《表5 刺五加目的基因SSR引物信息》

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《RNA-seq技术开发刺五加目的基因SSR标记》

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以皂苷、维生素、SOD、鞣质、脂肪酸、糖和酸等为目的性状，利用转录组数据中的Unigenes功能注释，筛选与上述性状相关的目的基因，包括与皂苷合成相关的SS（Squalene synthase）、HMGR（3-hydroxy-3-methylglutarylcoenzymeA）、SE（Squaleneepoxidase）、DXPS（1-deoxy-D-xylulose-5-phosphate synthase）和OSCs（Epoxy squalene cyclase）基因（邢朝斌等，2012；2014），与脂肪酸合成相关的ACC（Acetyl-coA carboxylase）、KASⅡ（3-ketoacyl-ACP-synthaseⅡ）、KASⅢ（3-ketoacyl-ACP-synthaseⅢ）、FATB（Fatty acyl-ACP thioesterase B）、FATA（Fatty acyl-ACP thioesterase A）、SAD（Stearoyl desaturase）、FAD2（Delta-12 desaturase）、GPAT（Glycerol-3-phosphate acyltransferase）、DGAT（Diacylglycerol acyltransferase）和KCS（3-ketoacyl-CoA synthase）基因，与糖酸合成相关的Fructose-bisphosphate aldolase、Citrate synthase、Malate dehydrogenase、Phosphoenolpyruvate carboxylase、Alpha-amylase、Glucosidase、Sucrose synthase、Neutral invertase、Pectinesterase、Polygalacturonase基因，与维生素合成有关的TC（Tocopherol cyclase）、GDP-mannose pyrophosphorylase和Myo-inositol oxygenase基因（邹礼平等，2012），以及SOD基因。利用Primer 3.0软件设计107对目的基因SSR引物，以刺五加叶片基因组的DNA为模板进行PCR扩增，采用琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物扩增情况，其中56对引物扩增出清晰的目的条带（表4；表5），有效扩增效率为52.33%，部分引物的扩增情况（图2）。