《表1 目的基因引物序列信息表》

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《利用慢病毒载体建立fractalkine基因敲低的HK-2稳定细胞株》

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*引物含交换配对碱基、酶切位点和目的基因5’端部分序列用于PCR钓取目的基因

用AgeI/EcoRI酶对载体质粒GV248（hU6-MCS-Ubiquitin-EGFP-IRES-puromycin）进行双酶切，将上海吉凯基因化学技术有限公司设计合成的目的基因序列FKN （52621-1）(表1） 连接到载体上，获取连接产物，经扩增、纯化后转化感受态大肠埃希菌DH5α，涂布于LB平板抗性培养，挑取单克隆菌落进行PCR鉴定[鉴定引物FKN (52621-1）]，将鉴定正确的质粒交付上海吉凯基因化学技术有限公司完成测序。将测序正确的菌液转移接种植到10ml含相应抗生素的LB培养基中，在37℃下培养过夜，采用无内毒素质粒小提取试剂盒进行抽提，选择抽提合格的质粒进入后续流程。