《表1 目的基因的引物序列》

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《慢病毒介导NGF过表达转染促进骨髓间充质干细胞向神经细胞转化的研究》

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注:GFAP:胶质纤维酸性蛋白；NSE:神经元特异性烯醇化酶；h GAPDH:人甘油醛-3-磷酸脱氢酶。

3组细胞融合率达80%，0.25%胰蛋白酶消化后放入15 ml离心管，加入1 ml的Trizol RNA iso（Takara，日本），提取总RNA，根据Takara逆转录试剂盒的说明书，检测总RNA的纯度，为1.9～2.0。逆转录cDNA保存在4℃冰箱中备用。根据TaKaRa荧光定量PCR试剂盒的说明书的要求，采用20μl的反应体系，加入各样品。进行荧光定量PCR的检测。采用FS2000系统对PCR进行分析，反应条件预设为预变性:95℃30 s；1个循环。PCR:95℃5 s；60℃30 s，40个循环。溶解曲线:95℃5 s；60℃1 min。降温:50℃30 s，1个循环。内参基因GAPDH和表皮成纤维细胞的标志物小鼠抗波形蛋白（Vimentin）引物由上海生工公司生产（表1）。采用2-△△CT的方法计算目的基因的相对表达量。