《表1 目的基因的引物序列》

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《短发夹RNA TRPV4基因对脊柱侧弯大鼠模型椎间盘退变的抑制作用》

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处理3个月后处死大鼠，取T12-L1节段椎间盘髓核组织，研磨棒充分研磨。利用Trizol法提取RNA，TaKaRa荧光定量PCR试剂盒检测iNOS，炎症相关因子环氧合酶2（COX-2）、MMP-9、凋亡相关因子B淋巴细胞瘤-2基因（Bcl-2）、Bcl-2家族抗凋亡因子（Bad）、Bcl-2家族相关X蛋白（Bax），以及含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3（Caspase-3），Caspase-6和Caspase-9的m RNA表达水平，根据反应体系的不同，加入各试剂。采用上海RT-PCR仪器进行分析，总时间设置为2 h。1.2.7 Western-blotting检测iNOS，MMP-9的蛋白表达水平处理3月后处死大鼠，取T12-L1节段椎间盘髓核组织，研磨棒充分研磨。RIPA细胞裂解液裂解细胞，提取总蛋白，95℃金属浴煮沸后备用，同时按照Western blotting制胶说明配置分离胶和浓缩胶，查询iNOS和MMP-9的分子量，根据分子量大小选择配置1 0%分离胶和20%浓缩胶。加入20μL上样蛋白，直流电电泳100 min，交流电电泳10 min。待蛋白电泳分离后，等离子转膜后，加入iNOS和MMP-9鼠源一抗（Abcam公司，1∶1 000稀释），4℃避光孵育过夜（>12 h）。12 h后PBST洗膜，每次20 min，加入山羊抗鼠IgG二抗（艾美捷科技有限公司，1∶5 000稀释），避光孵育1.5 h，PBST洗膜，每次20 min，重复3次，DAB显影液处理。Image J软件分析蛋白条带。