《表5 落叶松PAL基因各碱基区域PCR扩增的引物》

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《长白落叶松PAL基因SNPs筛选及木质素含量关联分析》

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参考NCBI数据库中同属日本落叶松的PAL基因序列，利用Bioedit软件对合成引物进行设计，先在1～100 bp范围内，根据各种可能的正向引物和反向引物的内部配对及相互配对情况，参考引物退火温度，选择出第1个碱基区域及其最佳引物，以此为基础进行第2个碱基区域及其最佳引物设计，直到覆盖该基因全序列为止。以PAL基因的2 160个碱基全序列为基础，设定扩增片段长度为1 200～1 300个碱基，PAL基因被分成了2个扩增区域，利用软件进行扩增区域的引物设计，对每一个碱基区域分别选择出较合适的2个正向和2个反向引物，其碱基序列范围分别为55～1 362，929～2 140（表5）。为了验证PAL基因是否在长白落叶松中表达，以L1、L2及L5等3个无性系的根、茎、叶的RNA进行反转录，利用cDNA验证此基因是否在落叶松中表达。