《表1 绵羊Fsp27基因5'-UTR区的PCR扩增引物》

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《绵羊Fsp27基因5'-UTR区碱基突变与尾脂沉积能力的关联性》


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以不同绵羊品种基因组DNA为模板,选用表1中的引物分别对Fsp27基因5'-UTR区进行PCR扩增,PCR反应体系25.0μL:DNA模板(100 ng/mL)1.0μL,10×PCR Buffer 2.5μL,dNTPs(10 mmol/L)2.0μL,上、下游引物(10 mmol/L)各0.5μL,Taq DNA聚合酶(2.5 U/L)0.5μL,加ddH2O补足至25.0μL。扩增程序:94℃预变性5 min;94℃30 s,58℃30 s,72℃30 s,进行35个循环;72℃延伸10 min,4℃保存。PCR扩增产物经1.5%琼脂糖凝胶电泳检测后,参照甘尚权等(2013b)的方法对其进行SSCP检测,挑选不同带型的PCR扩增产物进行测序,以确定其对应的突变位点,并分析相关突变与绵羊品种尾脂沉积能力的关联性。