《表3 4个叶绿体基因间区的PCR扩增条件》

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《新疆野苹果叶绿体DNA变异与遗传进化分析》

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从Shaw等[30]报道的叶绿体DNA序列中选取4个基因间区trn H-psb A、trn S-trn G spacer+intron、trn T-5′trn L和5′trn L-trn F对应的4对叶绿体通用引物（表2），交由上海生工（Sangon）生物工程股份有限公司合成。50μL的PCR反应体系：DNA模板2μL，正向和反向引物（10μmol/L）各2.5μL，d NTP（2.5 mmol/L）5μL，10×Buffer 5μL，Taq DNA聚合酶（5 U/μL)0.6μL，ddH2O 32.4μL。参照Volk等[31]报道的反应条件，对4个基因间区的PCR扩增条件进行优化（表3）。242份种质4个叶绿体间区的PCR产物用2%的琼脂糖凝胶电泳检测，对于扩增成功并得到单一条带的样品直接送测序公司进行测序。每个样品在每个叶绿体DNA间区的扩增产物均进行正、反向测序，242份材料的4个间区的叶绿体DNA序列全部测通。