《表3 楸子4个叶绿体DNA基因间区的PCR扩增条件》

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《基于叶绿体DNA分析的楸子种质遗传多样性研究》

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从Shaw等（2005）报道的叶绿体DNA序列中选取4个基因间区trn H-psb A、trn S-trn G spacer+intron、trn T-5′trn L和5′trn L-trn F对应的4对通用引物（表2），由上海生工（Sangon）有限公司合成。50μL的PCR反应体系：DNA模板2μL，正向和反向引物（10μmol·L-1）各2.5μL，dNTP（2.5mmol·L-1）（TaKaRa，Japan）5μL，10×Buffer 5μL，Taq DNA聚合酶（5μmol·μL-1)（TaKaRa，Japan）0.6μL，ddH2O 32.4μL。参照Volk等（2015）报道的反应条件，对4个叶绿体DNA基因间区的PCR扩增条件进行优化（表3）。49份种质4个叶绿体DNA基因间区的PCR产物用2%的琼脂糖凝胶电泳检测，对于扩增成功并得到单一条带的样品直接送测序公司[上海美吉测序公司（北京）]进行测序，测序仪为美国ABI 3730 DNA Sequencer。每个样品在每个叶绿体DNA基因间区的扩增产物均进行正、反向测序，测定2次，获得49份材料的4个叶绿体DNA基因间区的完整序列。