《表5 目标基因的PCR扩增引物》
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《水稻育性调控相关基因RNAi载体的构建及其表型鉴定》
基于文献和基因注释等相关依据(Komori et al.,2004;Kazama et al.,2008;Ohnishi et al.,2011;Abiko et al.,2013;Koiso et al.,2017),筛选水稻在生殖发育过程中的9个重要调控基因(表4)。其中,AT61、AT62和AT63 3个RNAi表达载体靶标花粉育性的调控,AT64、AT65和AT66 3个RNAi表达载体靶标卵细胞发育的调控,AT67、AT68和AT69 3个RNAi表达载体靶标合子胚发育的调控。利用NCBI(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/)网站Primer designing tool在线工具进行引物设计。在GenBank(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/genbank/)网站上,查询各基因的全长序列,并在NetGene2网站上预测各基因5'UTR(Untranslated region)启动子序列。利用软件Primer Premier 5.0设计引物(表5)分别用于扩增各基因。以Ilmibyeo基因组cDNA为模板,扩增各基因目的片段。PCR的程序为:95℃3 min(预变性);95℃10 s(变性),63℃10 s(退火),72℃15 s(延伸),35个循环;72℃5 min(延伸),4℃(保存)(各基因的引物不同,退火温度也有所不同(表5))。PCR产物使用1%琼脂糖凝胶电泳检测,并使用DNA回收试剂盒纯化目的条带,取3μL纯化产物进行电泳检测。检测结果无误后,用T4 DNA连接酶将目的片段与y T&A克隆载体连接转化DH5α感受态细胞。次日选择白斑进行PCR和培养,比对条带大小,验证后送华大基因测序。测序正确即得到重组克隆载体(朱骞等,2018b)。
图表编号 | XD00152855400 严禁用于非法目的 |
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绘制时间 | 2020.04.28 |
作者 | 李梦婷、周丽、朱骞、Sadia Nadir、郭效琼、李伟、冯天、陈丽娟、李东宣 |
绘制单位 | 云南农业大学稻作研究所、云南农业大学稻作研究所、云南农业大学稻作研究所、云南农业大学省部共建云南生物资源保护与利用国家重点实验室、本努科技大学化学系、中国科学院昆明植物研究所山地生态系统研究中心、云南农业大学稻作研究所、云南农业大学稻作研究所、云南农业大学稻作研究所、云南农业大学稻作研究所、云南农业大学省部共建云南生物资源保护与利用国家重点实验室、云南农业大学稻作研究所、云南农业大学省部共建云南生物资源保护与利用国家重点实验室 |
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