《表3 甲基化引物序列及参数》

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《沙葱提取物对杜寒杂交羊肌肉脂代谢相关基因表达及甲基化的影响》

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F1:上游引物1 forw ard primer 1；R1:下游引物1 reverse primer 1；F2:上游引物2 forw ard primer 2；R2:下游引物2 reverse primer 2。

DNA提取采用DNA提取试剂盒（天根，北京），经检测DNA浓度和纯度均符合要求，使用EZ DNA M ethylation-GoldTMKit甲基化试剂盒（Zymo Research公司，美国）将基因组DNA未被甲基化修饰的胞嘧啶转化为胸腺嘧啶。通过美国国家生物技术信息中心（NCBI）查询基因并对目标区域CpG位点进行分析，由上海天昊生物科技有限公司利用软件（http://primer3.ut.ee/）设计合成多重PCR引物，甲基化引物序列及参数见表3。以经重亚硫酸氢盐转化后的基因组DNA为模板，经目标CpG区域的多重PCR扩增，琼脂糖凝胶纯化回收，建立文库，最终于Illumina Miseq平台进行高通量测序，获得FastQ序列，FastQ序列与绵羊基因组参考序列进行比对（此方法具体操作见文献[16]）。目的区域的多重PCR扩增结合二代测序，能准确计算每个CpG位点的甲基化水平。