《表7 接头和引物序列:贵州不同地区白三叶基因组甲基化MSAP分析》

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《贵州不同地区白三叶基因组甲基化MSAP分析》


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接下来进行连接反应,将酶切片段和能与Eco RⅠ和HpaⅡ/MspⅠ酶切位点互补的人工接头相连接(表7)。反应体系为20μL,其中包含2μL 10×T4Buffer,0.4μL 20μmol/L Eco RⅠ接头,0.4μL 20μmol/L HpaⅡ/MspⅠ接头,其余用水补齐,16℃过夜。在94℃变性30 s,56℃退火1 min,72℃延伸1 min,26个循环,72℃延伸10 min的PCR条件下进行预扩增。反应体系为20μL,包含0.4μL 10 mmol/L dNTPs、2μL 10×Buffer、0.2μL 5 U/μL Taq酶、0.5μL 10μmol/L E00-primer、0.5μL 10μmol/L M00-primer,其余用水补齐。