《表1 MSAP所用的引物和接头序列》

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《广藿香DNA甲基化水平与其主要化学成分含量的相关性研究》

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用植物DNA提取试剂盒提取DNA，通过0.8%琼脂糖凝胶电泳和超微量紫外分光光度计检测DNA的质量、浓度与纯度。提取之后，稀释至20 ng/μL，-20℃保存。随后根据文献[13]的方法做适当修改后进行酶切、连接和PCR扩增。所使用的10对选择性扩增引物（如表1所示）来自黄洁燕[14]对广藿香的MSAP的引物筛选结果。选择性扩增的产物经变性后，取5μL样品进行6%变性聚丙烯酰胺电泳，之后银染并拍照，使用Quantity One 4.62对电泳图片背景降噪后统计条带并分析。根据某一条带在EcoRⅠ-HpaⅡ与Eco RⅠ-MspⅠ组合的出现与否，将条带分为4种类型:类型（1），在Eco RⅠ-MspⅠ（E-M）与Eco RⅠ-HpaⅡ（E-H）中同时出现，代表了该位点是非甲基化位点；类型（2），在E-M中出现，而在E-H中没有出现，代表了该位点发生了内部胞嘧啶的全甲基化或半甲基化，下文称为“全甲基化”；类型（3）在E-M中没有出现，而在E-H中出现，代表了该位点发生了外部胞嘧啶的半甲基化，下文称“半甲基化”；类型（4）在E-M与E-H中都没有出现，代表该位点发生了超甲基化或者条带缺失。为方便后续分析及减少统计错误率，本研究中仅考虑前3种类型。