《表1 蔗糖或Percoll密度梯度离心后介质质量分数为90%层的EHP孢子数量统计》

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《两种分离纯化介质对虾肝肠胞虫孢子发芽率的影响》

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经差速离心得到的EHP孢子粗提液中EHP孢子数为每1mL 2.0×108个。将此粗提液再经过蔗糖或Percoll溶液进行非连续密度梯度离心纯化，离心前后的情况如封三彩图2所示。从封三彩图2可知，EHP孢子主要分布在在蔗糖质量分数为90%层的底层和Percoll质量分数为90%层的下层。图3则显示，差速离心后得到的EHP孢子粗提液仍存在组织碎片，而经蔗糖或Percoll密度梯度离心纯化后的提取液中的EHP孢子纯度较高。EHP孢子在分离纯化介质各层中的分布情况如图4所示。从图4a，c，e可以看出：蔗糖质量分数为90%层中的EHP孢子纯净且少有杂质；蔗糖质量分数为60%层中含少量EHP孢子，含大量杂质；蔗糖质量分数为30%层中主要为杂质，含有极少量EHP孢子。从图4b可以看出：EHP孢子集中在Percoll质量分数为90%层，且该层下层的EHP孢子比较纯净，少有杂质；该层中层则含有大量EHP孢子和杂质，分离效果不理想。此外Percoll质量分数为60%层和Percoll质量分数为30%层中主要为杂质，未见孢子（图4d，f）。使用血球计数板统计两种介质纯化的90%层EHP孢子的数量，得到蔗糖质量分数为90%层的底层孢子数为1.53×108个，Percoll质量分数为90%层下层的孢子数为2.64×107个（表1）。