《表1 F-MSAP接头和引物序列》

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《锥低磷胁迫响应基因的功能及代谢通路分析》


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样品采自鼎湖山大样地,共采集381个锥个体样品,每个体取不同部位新鲜叶片,利用改良的CTAB法进行DNA提取。利用HapⅡ、Msp I与EcoR I对基因组DNA进行双酶切;再将酶切产物连上接头,设计并筛选引物进行预扩增,利用荧光标记的引物进行选择性扩增。该实验参考刘孟等(2017)的锥F-MSAP扩增优化体系。在EcoR I、HpaⅡ/Msp I通用引物的基础上(Xiong et al.,1999),在引物前后随机添加若干碱基,组合成不同引物,对用于选择性扩增引物进行筛选,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳共筛选出6对符合实验条件的引物对,用于选择性扩增(表1):E3/H-M2、E5/H-M2、E6/H-M1、E8/H-M1、E8/H-M5、E9/H-M2。扩增产物送至广州艾基生物技术有限公司利用Hi Seq2500平台进行高通量测序。