《表1 cDNA-AFLP的接头和引物序列Adaptor and primer sequences for cDNA-AFLP》

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《基于cDNA-AFLP分析桂花开花进程中差异表达基因》

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AFLP分析步骤参考Bachem et al.（1996）。利用T4 DNA连接酶（Fermentas公司）对酶切后的cDNA分别进行接头连接，然后分别利用EcoR00/Mse00和Ase00/T00引物进行PCR预扩增，取5μL的预扩增产物用1%琼脂糖凝胶电泳检测。对合适的预扩增产物进行50×稀释，之后利用16条EcoRⅠ引物和16条MseⅠ引物组成256对引物组合进行选择性扩增。引物见表1。选择性扩增反应总体积为20μL，包含1μL模板，EcoRⅠ和MseⅠ选择性扩增引物（10μmol·L-1）各1μL，10μL 2×DreamTaq PCR Master Mix（Fermentas公司）；扩增反应条件:95℃3 min；95℃变性30 s，65℃（每个循环递减0.7℃）退火30 s，72℃延伸1 min，12个循环；95℃变性30 s，56℃退火30 s，72℃延伸1 min，25个循环；72℃终延伸5 min。扩增产物经6%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离得到差异表达片段。